不稳定血红蛋白是血红蛋白病的一种类型。国内已发现的不稳定血红蛋白有十余种。目前常用于鉴别不稳定血红蛋白的方法有三种。
加热法<5%。
异丙醇法阴性。
红细胞变性球蛋白小体法<1%。
升高(或阳性)不稳定血红蛋白病。
(1)热不稳定试验:
①被检Hb要新鲜制备。陈旧Hb可转变为高铁Hb。会出现假阳性。
②保温时间要准确,温度要恒定以免出现假阳性。
(2)异丙醇试验:
①17%异丙醇溶液配制后放置不宜过久,否则易出现假阴性。
②血红蛋白液须新鲜。如保存较久,出现高铁血红蛋白,可形成假阳性。
③试剂要预热,严格控制温度以防假阳性。
④高HbF及G-6-PD缺乏的标本亦可出现阳性。
(3)红细胞变性珠蛋白小体检查:
①本试验亦可用静脉抗凝血做。
②孵育时间与不稳定血红蛋白性质有关。一般1~2h即可出现明显的蓝色球形折光小体,但也有的不稳定血红蛋白需更长时间的孵育。才出现典型的变性珠蛋白小体。
③制片后应及时计数,存放过久,则红细胞内变性珠蛋白小体消失。如不能及时计数,可存放于干燥器或37℃温箱。
④煌焦油蓝染色后不能用伊红-美蓝染色液复染,复染后可减少计数结果。
⑤变性珠蛋白小体需与网织红细胞鉴别。前者包涵体呈较大圆形,均匀,弥散沉淀,整个红细胞基质消失,而且需培育10min以上才逐渐清晰。而网织红细胞在血液与煌焦油蓝混合后数分钟内显示出网状沉淀,红细胞基质完整。
异丙醇试验:
(1)将放于37℃水浴中预热5min的装有17%异丙醇溶液1ml的小试管取出,立即加入0.1ml血红蛋白液,混匀后再放入水浴中,立即计时,于5、10、20、30、40min分别观察沉淀产生。
(2)结果判断:
(++++)5min出现沉淀,20min出现大块沉淀。
(+++) 5min出现混浊。到40min出现粗颗粒。
(++) 10min出现混浊,到40min出现细颗粒。
(+) 20min出现混浊,40min出现极细颗粒。
(-) 温育40min后仍透明或稍混浊而无颗粒。
(3)红细胞变性珠蛋白小体检查:
①取煌焦油蓝试剂0.5ml置小试管内,加新鲜血3~4滴,混匀,加塞,置37℃温箱中孵育。
②在10min,1h,24h各取出一滴制成薄血片,立即风干,油镜下观察。
③在油镜下计数500个红细胞,记录出现蓝色颗粒状折光小体的红细胞数目,求出阳性百分率。
无禁忌人群。
1、皮下出血:由于按压时间不足5分钟或是抽血技术不过关等原因可导致皮下出血。
2、不适感:穿刺部位可能会出现疼痛、肿胀、压痛、肉眼可见的皮下瘀斑等。