自然杀伤细胞又称NK细胞,其主要的功能特征是对肿瘤细胞及病毒感染细胞具有非特异性的杀伤力,这种杀伤效应不依赖抗体与补体,体外检测NK细胞活性是诊断NK细胞功能及其与某些疾病关系的一个重要手段。
自然释放率要求<10%;自然杀伤率大约35%~85%,平均值60%。
K细胞主要分布在腹腔渗出液,外周血、脾脏中;NK细胞主要分布在骨髓、外周血和脾脏中。临床主要用于肿瘤、病毒感染、寄生虫感染、自身免疫和移植免疫等病人,检测其K、NK细胞杀伤功能,在维持和调节特异性免疫中起重要作用。
(1)要求效/靶细胞比为100∶1,若比>100∶1,自然杀伤率不呈对数增加。且标本用量亦大。
(2)标记靶细胞放置时间不宜过久。因随时间延长死细胞增加,自然释放率欠准确。
(3)标记的125IUdR浓度要合适,要求125IUdR的放射性浓度为1.11×107Bq/ml,如浓度过低,标记率<0.1cpm细胞,检测结果受影响。
(1)效靶细胞作用:将分离好的淋巴细胞悬液(效应细胞)和标记的K562细胞(靶细胞)按100∶1的比例加入平底塑料试管中,按表1操作,同时设自然释放管(作为对照管),每个标本作了3个复管,最后用培养液使每管增至1ml,1500r/min离心,促进效靶细胞结合,置37℃、5% CO2孵箱内孵育18h。
(2)酶促反应:取出孵育试管,弃去各管上清液,剩下的细胞加一定浓度(2.2g/L)胰蛋白酶和DNA酶各0.1m1,混匀后37℃水浴30min,促使被攻击的靶细胞释放125IUdR,随后各管立即加入0.8ml Hank液终止酶促反应。混匀后1500r/min离心2min。
(3)测放射强度和计算:用γ型计数器分别测各管(上清和细胞管)cpm值,按照公式计算。
造血功能减低的人如白血病、各种贫血、骨髓增生异常综合症等患者或血小板减少的人抽血时应注意,不宜多抽或频繁抽血。
1.抽血结束后,不要按揉针孔部位,以免造成皮下血肿。如果抽血处有小片青淤,轻微触痛,请不要慌张,可过24小时后再做热敷,以促进淤血吸收。一般的小量淤血会在3到5天的时候内逐渐吸收而颜色变浅,恢复正常。
2.抽血后出现晕血症状如:头晕、眼花、乏力等应立即平卧、饮少量糖水,待症状缓解后再进行体检。