流式细胞DNA分析是可以研究间期细胞，并不受细胞增殖状态的影响，对检测 胸腔积液 中的恶性细胞的有重要意义的一种检查方法。 流式细胞仪的检测范围: 1.流式细胞仪可以检测细胞结构，包括细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、RNA 含量、蛋白质含量。 2.流式细胞仪可以检测细胞功能，包括细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。
身体处于动态平衡中，没有疾病。
流式细胞仪的临床应用:
1.流式细胞术在肿瘤学中的应用流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡;
2.流式细胞术在血液学中的应用检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞(CD34+)计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测;
3.流式细胞术在免疫学中的应用可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。
异常结果有资料表示对71例胸腔积液做流式细胞DNA分析，结果显示，对恶性胸腔积液诊断的敏感性为52%，特异性达100%。若与常规检查联合应用，则可使诊断的敏感性达到94%。癌性胸水细胞的DNA分析可见异倍体和S期、G2/M期细胞比例增高。
需要检查的人群疑似有癌性胸水等相关疾病者。
流式细胞仪并非是完全自动化的仪器，准确的实验结果还需要准确的人工技术配合，所以标本制备需要规范，仪器本身亦需要质量控制。
(一) 流式细胞术免疫学检测的影响因素和质量控制
流式细胞术在免疫学中有着广泛的应用，其免疫荧光染色的标本制备非常重要，常常由于标本制备过程中出现人为非特异性荧光干扰(尤其在间接免疫荧光染色中)或细胞浓度低等影响检测结果。解决这些影响因素的方法如下：
(1) 确保标本上机检测前的浓度为1X106细胞/ml，细胞浓度过低直接影响检测结果。
(2) 使用蛋白封闭剂，封闭非特异结合位点，尤其在间接免疫荧光标记时必不可少。常用的蛋白封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。
(3) 荧光抗体染色后充分洗涤，注意混匀和离心速度，减少重叠细胞和细胞碎片。
(4) 设置对照样品，采用与抗体来源同型匹配的无关对照和荧光抗体的本底对照。
(5) 判定结果时，应注意减去本底荧光，为使免疫荧光的定量分析更精确，应用计算机程序软件，用拟合曲线方法从实验组的曲线峰值中减去对照组的曲线峰值，可以得到更准确的免疫荧光定量结果。
(6) 注意染色后避光，保证细胞免疫荧光的稳定。
(二) DNA 倍体分析的质量控制仍没有统一的标准，各文献报道的实验结果差异较大，1993年10月美国癌症研究组织制定了FCMDNA 测定的统一标准，我们根据这些标准并结合国内有经验的专家多年的实践，对FCM的DNA分析技术的质控和注意事项进行说明。
(1) 手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时，要避免出血坏死组织。
(2) 标本采集后要及时固定或深低温保存，以免组织发生自溶，DNA 降解，而造成测试结果的误差。
(3) 固定剂要采用对组织细胞穿透性强的浓度，70%的乙醇固定效果较好。
(4) 单细胞悬液制备过程中，注意将待测细胞成分分离出来，减少其他成分的干扰，并注意不要损伤该群细胞。
(5) 细胞样品的采集要保证足够的细胞浓度，即1X106细胞/ml，杂质、碎片、团块和重叠细胞应<2%，对肿瘤细胞DNA异倍体的分析样品，至少有20%的肿瘤细胞存在。
(6) 石蜡包埋组织单细胞制备时要注意：取材时应选取无自溶、坏死的组织，对肿瘤组织标本，选取含肿瘤细胞丰富的区域;石蜡组织片的厚度要适宜，最好为40～50μm 。过薄或过厚的切片均会影响检测结果;彻底脱蜡，以免残留的石蜡影响酶的消化活性，验证脱蜡是否完全的方法是弃去二甲苯，加入100%乙醇，如果无絮状物浮起，说明蜡已脱净;水化要充分，使组织还原到与新鲜组织相似的状态;注意消化的时间和消化酶的活性。常规使用0.5%胃蛋白酶，pH 1.5。
(三) 操作方面
(1) 流式细胞仪在整个工作过程中处于最佳状态，能保证定量检测的准确性和检测精度。使用标准样品调整仪器的变异系数在最小范围，分辨率在最好状态，能避免在测量过程中仪器条件的变化引起的检测误差。
(2) 评价仪器精度的重要指标是仪器的变异系数(CV)，对于校准样品，其CV值越小越好，CV值越小，说明仪器校正的精度越高。校准样品包括非生物样品(荧光微球)和生物细胞样品(人淋巴细胞、鸡红细胞等) 。目前，非生物荧光微球已有商品试剂，CV一般<2%～3%。
(四) 资料分析方面
(1) 当样品中碎片杂质或团块过多，所测细胞数在20%以下，组方图的基线抬高时，应放弃分析处理。
(2) 做细胞周期分析时，样品细胞数应在1万个，排除碎片、杂质和团块，当异倍体细胞数占总细胞数10%以下时，需要结合其他诊断指标，不可盲目下结论，至少异倍体细胞占总细胞数的20%以上，可以确定异倍体的存在。
(3) DNA分析时，正常二倍体细胞组方图CV值>8%时放弃分析，但肿瘤细胞的CV值>8%，与肿瘤细胞的异质性有关。另外，DNA倍体分析时，同源组织的不同个体会出现10 %的漂移。
(4 )DNA倍体标准的质量控制，采用相同个体同源正常组织、同样固定方法、相同的样品处理方法、相同的染色方法、同步染色、同样的仪器检测条件、正常的二倍体组织作为内标准。
流式细胞DNA分析：直接用可产生荧光的核酸染料(如碘化丙啶)对胸水中细胞进行染色，流式细胞仪分析胸水细胞的DNA含量、细胞周期分布和DNA倍体数。
流式细胞术常规检测时的样品制备:
(一) 直接免疫荧光标记法
取一定量细胞(约1X106细胞/ml )，直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，孵育20～60分钟后，用PBS(pH7.2 ～7.4)洗1～2 次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。
(二) 间接免疫荧光标记法
取一定量的细胞悬液(约1X106细胞/ml )，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原-抗体-抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。
无。
