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PHA淋巴细胞转化试验

PHA淋巴细胞转化试验是T淋巴细胞与有丝分裂原在体外共同培养时,受到后者的刺激可发生形态学和生物化学的变化,部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细胞,并进行有丝分裂的试验方法。

基本信息

专科分类:肿瘤科检查分类:免疫检查

适用性别:男女均适用是否空腹:非空腹

参考价格:10~90元/项

温馨提示:
注意健康的饮食,保持良好的心情。
正常值

计数淋巴细胞200个,识别淋巴母细胞(超过正常淋巴细胞2~4倍,核膜清晰,核染质疏松而成细网状,核仁明显,胞浆丰富,呈嗜碱性)、过渡型淋巴细胞(体积变化不大,仅为上述明显核变化)、小淋巴细胞(体积稍大于红细胞,核染质致密,无核仁),统计其转化率。皮肤科转化率正常值大于58%。

临床意义

PHA淋巴细胞转化率下降,是细胞免疫功能降低的反应。此项检查,皮肤科多用于疾病分型(如麻风)、病情判断(如皮肤恶性肿瘤)、药物疗效观察,以及某些免疫缺陷性和变态反应性皮肤病的研究。

异常结果

免疫功能降低引发的各种症状。

需要检查的人群疑似麻风、皮肤恶性肿瘤症状的病人。

注意事项

1.培养基成分对转化率影响较大,注意其有效期。

2.小牛血清用前需灭活。

3.培养时要保证有足够的气体,一般10ml培养瓶内液体总量不要超过2ml。

4.PHA剂量过大对细胞有毒性,太小不足以刺激淋巴细胞转化,试验前应先测定PHA转化反应剂量。

5.实验中要严格无菌操作,防止污染。

检查前禁忌:注意健康的饮食,保持良好的心情。

检查时要求:积极配合医生。

检查过程

操作方法:

1.取无菌肝素抗凝血0.lml,加入1.8ml细胞培养液中,同时加入1 000μg/m1 PHA 0.1m1,对照管不加PHA,将细胞置37℃、5%CO2培养3d,每天摇动1次。

2.培养结束时吸弃大部分上清液,加入8.5g/L NH4Cl 4ml混匀,置37℃水浴10min。

3.2500r/min离心10min,弃上清液,沉淀加5ml固定液,室温作用5min。

4.2500r/min离心10min,弃上清液,留0.2ml沉淀细胞制片,迅速吹干。

5.吉姆萨染液染色 10~20min,水洗,干燥。

6.油镜计数200个淋巴细胞中转化的细胞数,计算转化率。

结果判断:

1.淋巴母细胞的形态学标准:细胞核的大小、核与胞浆的比例、胞浆染色性及核的构造与核仁的有无。

⑴成熟的小淋巴细胞:与未经培养的小淋巴细胞大小一样,为6~8μm,核染色致密,无核仁,核与胞浆比例大,胞浆染色为轻度嗜碱性。

⑵过渡型淋巴细胞:比小淋巴细胞大,约10~20μm,核染色致密,但出现核仁,此为与成熟小淋巴细胞鉴别要点。

⑶淋巴母细胞:细胞体积增大,约20~30μm,形态不整齐,常有小突出,核变大,核质染色疏松,有核仁1~2个,胞浆变宽,常出现胞浆空泡。

⑷其它细胞:如中性粒细胞在培养72h后,绝大部分衰变或死亡呈碎片。

2.淋巴细胞转化率的计算 按上述分类检查推片头、体、尾三部分,计数200个淋巴细胞,算出百分率。转化的淋巴细胞包括淋巴母细胞和过渡型淋巴细胞,未转化的淋巴细胞指的是成熟的小淋巴细胞。在正常情况下,PHA诱导的淋巴细胞转化率为60~80%,如为50~60%则偏低,50%以下则为降低。

再根据结果得出正确的判断。

不适宜人群

不合宜人群:暂时不明。

不良反应与风险

暂无相关并发症和危害。

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