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疟疾间接免疫荧光试验

疟疾的血清学诊断方法颇多,本节仅介绍常用的间接免疫荧光试验法。需要检查的人群:有明显的寒战、全身发抖、面色苍白、口唇发绀、皮肤干热、烦躁不安疲乏、头疼、不适、厌食等症状的人群。

基本信息

专科分类:传染病检查检查分类:血液检查

适用性别:男女均适用是否空腹:空腹

参考价格:50~115元/项

分析结果:

低于正常值时:

正常值:

高于正常值时:

阴性:
阴性<1∶20,提示未感染疟疾。

阳性:
荧光抗体法的阳性检出率,一般均高于原虫检出率。对恶性疟疾患者抗体效价为1∶80或更高,可认为是带虫者或近期感染疟疾的标志。

温馨提示:
抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果,体检前一天的晚八时以后,应开始禁食12小时,以免影响检测结果。
正常值

阴性<1∶20。

临床意义

荧光抗体法的阳性检出率,一般均高于原虫检出率。对恶性疟疾患者抗体效价为1∶80或更高,可认为是带虫者或近期感染疟疾的标志。

结果阳性可能疾病:
注意事项

检查前:

1、抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。

2、体检前一天的晚八时以后,应开始禁食12小时,以免影响检测结果。

3、抽血时应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩,增加采血的困难。

检查后:

1、抽血后,需在针孔处进行局部按压3-5分钟,进行止血。注意:不要揉,以免造成皮下血肿。

2、按压时间应充分。各人的凝血时间有差异,有的人需要稍长的时间方可凝血。所以当皮肤表层看似未出血就马上停止压迫,可能会因未完全止血,而使血液渗至皮下造成青淤。因此按压时间长些,才能完全止血。如有出血倾向,更应延长按压时间。

3、抽血后出现晕针症状如:头晕、眼花、乏力等应立即平卧、饮少量糖水,待症状缓解后再进行体检。

4、若局部出现淤血,24小时后用温热毛巾湿敷,可促进吸收。

检查过程

1、疟疾间接免疫荧光试验的原理

受检血清中的抗疟原虫抗体与血片上的疟原虫抗原相结合,继加荧光标记的抗人IgG抗体,使与血片上的人IgG作用,而在抗原部位显现荧光。

2、试剂

(1)抗原血片采用食蟹猴疟原虫薄血膜片和恶性疟原虫薄血膜片。专业研究机构可供应。保存于4℃或低温冰箱中备用。

(2)荧光标记抗人IgG,国内有商品供应。

3、操作方法

(1)按常规方法采集血清或用口径1.2cm的玻(铁)管的管口在滤纸上压出圆形印迹。从受检者耳或手指取血并加满圆圈,其血量约为20μl(约相当血清10μl),编号后阴干,放入有干燥剂的密封塑料袋内,运送至实验室,4℃可保存半年,-20℃可保存2年。检测时将干血滴剪下后放入反应板凹孔中,加0.01mol/L磷酸盐缓冲液0.2ml(pH值7.2),4℃浸泡过夜即成相当于1∶20的血清稀释液。

(2)从冰箱中取出抗原血片,立即用电风扇吹干,用特种蜡笔将每张抗原片划分成若干小格,每小格试1个标本或1个滴度,每格加血清1滴。每批试验均需设阴、阳性参考血清和PBS空白对照。加血清后立即移入湿盒,37℃温育30min后,用0.01mol/L PBS(pH值7.2)缓慢冲洗后放入有PBS的缸内浸泡5~10min。

(3)逐格滴加用0.01mol/L PBS(pH值7.2)稀释成1∶10的抗人IgG荧光抗体,置湿盒内37℃30min,同法洗涤后,每小格中加甘油和PBS等量混合液或蒸馏水,覆以盖片,于荧光显微镜下镜检反应结果。

(4)结果判读:以裂殖体和大滋养体胞浆的荧光强度和结构清晰程度区分,无荧光为(-),荧光微弱、形态结构不清为(±),荧光较弱、形态结构尚清楚为(+),另外根据荧光明亮度和结构清晰度的增加依次分为(2+)~(4+)。

一般以1∶20血清稀释度时荧光强度(+)以上判为阳性。

不适宜人群

无检查适应症者不宜做此项检查。

不良反应与风险

一般无并发症和危害。