乳酸脱氢酶是体内能量代谢过程中的一个重要的酶。此酶几乎存在于所有组织中,以肝、肾、心肌、骨骼肌、胰腺和肺中为最多。这些组织中的LDH的活力比血清中高得多。所以当少量 组织坏死 时,该酶即释放血而使其他血液中的活力升高。测定此酶常用于对心梗、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
1、酶速率法(37℃)218~458U/L;
2、比色法225~540U/L;
3、乳酸法(37℃)LDH-L109~245U/L;
4、丙酮酸法(37℃)LDH-P240~460U/L。
1、乳酸脱氢酶活性增高可作为诊断心肌梗塞的一个有用指标。心肌梗塞发生后12-48小时,LDH开始升高,2-4天达到高峰,8-9天恢复正常。
2、肝炎、肺梗塞、恶性肿瘤等也可使LDH升高。肿瘤转移所致的胸腹水中LDH往往也升高。
3、降低见于X线照射。
1、比色法:
①乳酸钾、乳酸钠也可作为LDH底物,但因其为水溶液,含量不够准确,且保存不当易产生酮酸类物质,抑制酶促反应。而乳酸锂为固体,稳定,易于称量。
②除二乙醇胺缓冲液外,也可用Tris或焦磷酸缓冲液,避免了原金氏法中甘氨酸缓冲液对LDH的抑制作用,提高了阳性检出率。
③比色应在5~15min内完成,否则吸光度降低。
④结果>2500U时,可用生理盐水稀释标本后再测,其结果乘以稀释倍数。
2、连续监测法:
①标本勿溶血,当溶血达Hb 0.8g/L时,LDH活性可升高58%。
②标本于室温(25℃)保存,2天内酶活性稳定,冰箱保存酶活性降低,-20℃过夜LDH3、LDH4则全部失活。
③用血清或肝素抗凝血浆测定结果满意,草酸盐可抑制LDH活性。
④复溶后溶液变浊或初始吸光度>0.5应弃去。
⑤利用正逆双向反应均可测定乳酸脱氢酶活性,但因反应温度、底物和缓冲液浓度不同,其参考区间也有差异。以乳酸和NAD为底物,在340nm监测吸光度增高速率为正向反应,以LD-L表示;以丙酮酸和NADH为底物,监测340nm吸光度下降速率为逆向反应,以LD-P表示。正逆反应两法相比,LD-L法的主要优点是:A.正向反应底物液的稳定性比逆向反应的稳定性大,前者冰箱可保存6个月以上,而后者仅几天;B.速率反应的线性范围(吸光度对监测时间t作图)较宽;C.重复性比LD-P好。由于逆向反应速度比正向反应速度快,其参考值约为LD-L的2倍。
静脉采血后立即送检,检测方法:
1、比色法:
混匀,室温放置5min后,在440nm波长,比色杯光径1.0cm,蒸馏水调零点,读取各管吸光度,以AU-AC之差值查标准曲线,求出LDH活力单位。
2、连续监测法:
各实验室可根据本室生化自动仪型号及说明书操作。主要参数为340nm波长,37℃,吸样量500μl,连续监测时间60s,标本与试剂体积之比为1∶50。
不合宜人群: 一般无不适合的人群。
1、感染:采集血液时注意无菌操作,采血处避免水液等污染,以免局部感染。
2、出血:采血后给予充分按压时间,尤其有凝血障碍,出血倾向者,避免局部皮下渗血,淤青肿胀。